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相差顯微鏡

相差顯微鏡定義

  • 未染色的活細胞幾乎不吸收光。光吸收差會導致圖像強度分布的差異非常小。這使得細胞在明場顯微鏡中幾乎看不到或根本看不到。相差顯微鏡是一種光學顯微鏡技術,可將穿過透明標本的光的相移轉換為圖像中的亮度變化。
  • 它是1934年由荷蘭物理學家Frits Zernikeshou次描述的。

相差顯微鏡原理

當光穿過細胞時,會發生小的相移,這是人眼看不見的。在相襯顯微鏡中,這些相移被轉換為幅度變化,可以觀察到圖像對比度的差異。

相差顯微鏡的工作

  1. 鎢-鹵素燈產生的部分相干照明被引導通過一個集光鏡,并聚焦在位于子級聚光鏡前焦平面上的專用環空(標記為聚光鏡環空)上。
  2. 穿過環形空間的波前照亮了樣本,并且未偏移或通過樣本中存在的結構和相位梯度而被相位衍射和延遲。
  3. 由物鏡收集的未衍射和衍射光在后焦平面被相位板隔離,并聚焦在中間像平面上,從而形成在目鏡中觀察到的zui終相襯像。